Самая знаменитая работа Грюневальда — громадный многостворчатый алтарь церкви монастыря Святого Антония в Изенхейме (1512—1515, Кольмар, Музей Унтерлинден). В нем наиболее ярко выразились духовные помыслы мастера, его нравственные идеалы, его творческие убеждения, его визионерское толкование цвета. В монастырь, посвященный Святому Антонию, считавшемуся целителем, стекались многочисленные паломники, жаждущие исцеления. Вся программа алтарного ансамбля была откликом именно на эту религиозную славу обители. Подвижная центральная часть и створки позволяли варьировать общий характер зрелища и предполагали возможность различного эмоционального воздействия на души зрителей. В обычные дни молящиеся видели перед собой мрачную картину Распятия. Изможденное, покрытое кровоточащими ранами тело Христа светилось на фоне бездонного ночного неба. У подножия креста слева — скорбные фигуры Богоматери, Марии Магдалины, Иоанна Евангелиста. Особенно впечатляет Мария Магдалина на коленях, со сцепленными, вскинутыми вверх руками, она словно взывает к небесам. Длинные золотистые волосы, рассыпавшиеся по розовому одеянию, создают необычайно красивый цветовой аккорд. Справа от креста — Иоанн Предтеча с указующим перстом. Это он предрек появление Спасителя, который жертвенной смертью искупит грехи человечества. Здесь же Агнец Божий — символ Христа.